肠杆菌和其他非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法）说明书
【产品名称】
通用名称：肠杆菌和其他非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法）
英文名称：API 20 E
【包装规格】
25 测试/盒、100 测试/盒。
【预期用途】
该产品用于肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌的鉴定。
该产品用于可导致腹泻、血流感染、尿路感染等的肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌的鉴定，临床常
见样本来源有粪便、直肠拭子、尿、血等。
【检验原理】
API 20 E 试条由 20 个含干燥底物的微量小管组成。将菌悬液接种到管内，使小管内底物溶解。孵育过
程中，所产生的代谢产物通过自发反应或加入附加试剂后而变色。鉴定结果可根据说明书的判读表进行
读出，也可参照生化谱检索手册或鉴定软件，得到鉴定结果。
【样本要求】
API 20 E 不能直接用于临床或其他标本（例如血样，尿样和粪样、直肠拭子等等）。需要进行鉴定的微
生物必须首先根据标准微生物处理技术于适合肠杆菌和/或非苛养革兰阴性杆菌生长的培养基上分离培
养。
【检验方法】
氧化酶试验：
必须按照制造商的使用说明进行氧化酶试验。由于它是最终图谱的组成部分，请将其结果记录于报告单
上（ 十一个试验）。
试条的准备
? 准备一个培养盒（盘和盖子），倒入约 5mL 蒸馏水或软化水【或其它不含添加剂或不含有能产生挥发
性气体（如 Cl2, CO2,等）的化学物质的水】于盘的蜂窝小凹中，造成一个湿室。
? 在盘的长边写上菌株号(不要写在盖上，因为操作过程中很容易将盖子放到其它试条上）
? 从包装中取出试条。
? 将试条置于培养盒中。
注意：API 20 E 只能用于肠道细菌和或非苛养的革兰阴性杆菌。苛养菌由于对营养有特殊要求并且需要
合适的防护措施(例如布鲁氏菌属 Brucella 和法朗西丝菌属 Francisella)，这些菌没有包括在 API 20 E 数
据库中。 必须采用其它方法，来排除或确认这些菌的存在。
接种物的准备
? 根据“警告及注意”一栏所列方法打开一安瓿 API 0.85% NaCl 培养基（5mL)或一安瓿 API 悬浮培养(5
mL), 或用含 5mL 0.85 NaCl 盐水或不含添加剂的无菌蒸馏水。
? 用吸管或 PSIpette 从分离平板上挑取单个分纯菌落至悬浮基物中。建议使用新鲜培养物（18-24
小
时）。
? 仔细研匀以达到均一的细菌悬液。
制备好的菌悬液必须立即使用。
注意：大多数弧菌（Vibrio)均嗜盐，如怀疑菌株为弧菌，请使用 0.85% NaCl (5mL)培养基。肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法） 版本号 07584J- zh -2010/05
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试条的接种
? 用同一根吸管，将菌悬液加入到试条的小管内。为避免在小管的基底部形成气泡，请将试条轻微向前
倾斜并把吸管或者 PSI 管紧靠小杯边缘加入菌液）：
- CIT、VP 和 GEL 小管，菌液需充满的管部和杯部。
- 其它管仅充满管部(不是杯部)。
- 在试验 ADH, LDC, ODC, H2S 和 URE 小杯内加入矿物油以形成厌氧环境。
? 盖上培养盒。于 36℃±2℃孵育 18~24 小时。
【阳性判断值】
请参考本说明书后的“反应鉴定表”，表中列出了各种生化反应预期结果范围。
【检验结果的解释】
试条的判读
? 孵育后，根据判读表表判读各反应结果。
? 如果 3 个或 3 个以上测定（GLU 试验+或-)为阳性结果，记录所有自发反应于结果报告单上并观察需
要
附加试剂的试验的结果：
- TDA 试验：加 1 滴 TDA 试剂。深褐色为阳性反应，记录于报告单上。
- IND 试验：加 1 滴 JAMES 试剂。整个反应管出现粉红色者为阳性，记录于报告单上。
- VP 试验：加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 试剂。至少等待 10 分钟，出现粉红或红色者表明为阳性结果，
记录于报告单上。如浅粉红色在 10 至 12 分钟内出现，判断结果为阴性。
注意：吲哚产生试验必须 进行，因为该反应释放的气体产物会千扰试条的其他试验。在加入附加
试剂后，请小心勿调换培养盒盖。
? 如果加入附加试剂前阳性结果（包括 GLU 试验）的数量少于 3 个：
- 重新培养 24 小时（土 2 小时），且不要加任何试剂。
- 重新进行需要加入附加试剂的试验（如前说明）。
- 为了完成鉴定，可能需要进行补充试验（参考有关鉴定的段落）。
解释
鉴定结果根据数值编码获得。
? 数值编码的确定：
在结果报告单，每 3 个试验为一组，每个阳性试验分别赋予数值 1、2 或 4，在每组中，阳性反应以相
应的数值相加，由此可得到一个 7 位数字的编码。氧化酶反应构成第 21 个试验，如阳性则赋予数值 4。
? 鉴定：
鉴定结果是根据数据库（V4.1)得到。
*根据鉴定检索手册：
- 从检索手册中查找数值编码。
*根据 apiweb TMM鉴定软件：
- 在键盘上输入 7 位数字的数值编码。
在某些情况下，7 位数字的数值编码还不能区分细菌，必须进行以下一些补充试验来进一步的鉴定：
- 硝酸盐还原到亚硝酸盐(NO2)和氮气(N2):各加一滴 NIT 1 和 NIT2 试剂于葡萄糖（GLU 管内，待 2~3
分
钟后，红色表示阳性结果(NO2)。阴性反应（黄色）可能由于还原至 N2 (有时还有气泡）：加 2-3mg 锌
粉到葡萄糖（GLU)管，5 分钟后，如果管保持黄色表示阳性结果(N2)，记录于报告单。如果变为橘红，
则是阴性反应：仍留在管内硝酸盐被锌粉还原。该反应对检测革兰阴性、氧化酶阳性的杆菌有用。
注意：出于和吲哚试验同样的原因（参考“试条的判读”中的注意项），硝酸盐还原试验必须 进行。
- 动力（MOB):接种一安瓿 APIM 培养基（参见产品说明书）。肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法） 版本号 07584J- zh -2010/05
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- 麦康凯（MacConkey)培养基生长实验(McC):接种一个麦康凯（MacConkey)平板（参见产品说明书）。
- 葡萄糖氧化（0F-0):接种一安瓿 API OF 培养基（参见产品说明书）。
- 葡萄糖发酵（OF-F):接种一安瓿 API OF 培养基（参见产品说明书）。
这些在数值编码本开始部分有所介绍的补充试验，可以组成 9 位数的数值索引。从而可以用鉴定软件
获得鉴定结果。
