链球菌及相关微生物鉴定试剂盒（比色法）
说明书
【产品名称】
通用名称：链球菌及相关微生物鉴定试剂盒（比色法）
英文名称：API 20 Strep
【包装规格】
25 测试/盒
【预期用途】
该产品用于测定链球菌（streptococci）、肠球菌(enterococci)和其它相关细菌的种或群鉴定。
临床常见样本来源有泌尿生殖道标本、呼吸道标本、血。该系统能鉴定的菌谱名单列于说明书后的鉴定表中。
【检验原理】
API 20 Strep 试条由 20 个含干燥底物的微量小管组成，能检测酶活性或糖的发酵。
酶活性测定是以由纯培养制成的浓菌悬液接种于含干燥的酶底物的微量小管中，使管内的底物溶解。在
培养期间，所产生的最终代谢产物通过自然反应或加入附加试剂而变色。
发酵试验是接种于由含糖底物组成的培养基中。发酵的碳水化合物通过 pH 指示剂颜色的改变来检测。
鉴定结果可根据说明书的判读表读出，也可参照生化检索手册或鉴定软件，得到鉴定结果。
【储存条件及有效期】
试条和培养基应在 2～8°C 储存，有效期为 12 个月。
生产日期：详见外包盒标签。
失效日期：详见外包盒标签。
【适用仪器】
- McFarland 标准比浊管 (Ref. 70 900) MCF 4 或光度计 DENSIMAT (Ref. 99 234)
- API 20 Strep 数值分析索引 (Ref. 20 690)
或 鉴定软件 (请于生物梅里埃公司联系）
【样本要求】
API 20 Strep 不能直接用于临床或其他标本（例如泌尿生殖道标本、呼吸道标本、血标本等等）。
需要鉴定的微生物必须首先根据微生物标准规程在合适的培养基上进行分离。
【检验方法】
菌落的选取
一旦要鉴定的微生物被分离并确认为链球菌属（Streptococcaceae）的成员（革兰氏染色和触酶试验），：
? 将溶血类型（第 21 个试验）记录于结果报告单上。
? 挑一个单个的菌落(注意 1)，将它悬浮于 0.3ml 无菌水中，充分均匀。
? 将该菌悬液注入 Columbia 羊血琼脂血板(注意 2)(或用无菌棉签涂抹琼脂平板的整个表面)。
? 于 36°C ± 2°C，厌氧培养 24 小时（± 2 小时）。
注意 1：β一溶血链球菌和肠球菌培养 24 小时后，会产生足够大的菌落；对其它链球菌需要培养 48 小时，才
能取得可供选择的菌落；对苛养菌(48 小时后只能产生小菌落)，推荐按下述步骤操作：链球菌及相关微生物鉴定试剂盒（比色法） 版本号 07625L-CN–2010/07
- 将菌落于 1 ml 的 Schaedler 肉汤培养液置 36°C ± 2°C 增菌培养 5 小时。
- 将整个培养物倒入哥伦比亚羊血琼脂平板上，弃去多余的液体。
- 平板于 36°C ± 2°C 厌氧培养 18-24 小时。
注意 2：如果怀疑为肺炎球菌者，为得到足够的生长物，应该制备 2 个平板。
试条的准备
? 准备一个培养盒（盘和盖子），倒入约 5ml 蒸馏水或软化水[或其它不含杂质或不含能产生挥发性气体（如
Cl2, CO2,等）的化学物质的水]于盘的蜂窝小凹中，造成一个湿室。
? 在盘的长边写上菌株号(不要写在盖上，因为操作过程中很容易将盖子放到其它试条上)
? 从包装中取出试条。
? 将试条置于培养盒内。
接种物的准备
? 根据"警告及注意"一栏所列方法打开一安瓿 API 悬浮培养基 (2ml)或使用 2ml 不含添加物的蒸馏水。
? 用棉签收集已接好种的平板的培养物。
? 制得浊度大于 4 个麦氏标准单位的浓菌悬液。该菌悬液制备好后必须立即使用。
试条的接种
? 在试条的前一半( VP 至 ADH 测试)，用无菌吸管接种该菌悬液，避免产生气泡(将试验条向前稍倾斜，并将
吸管顶部靠至小管内缘加液体)：
- VP 到 LAP 的试验： 每管加入约 100 μl 菌悬液。
- 对于 ADH 试验：只充满管的部分
? 在试条的后一半 ( RIB 至 GLYG 测试)：
- 根据"警告及注意"一栏所列方法打开一安瓿 API GP 培养基并转入剩下的菌悬液 (约 0.5ml) ，充分均匀。
- 这个新的菌悬液只接种到管的部分。
? 用矿物油覆盖在带下划线的试验(ADH 至 GLYG)的杯的部分，形成一个凸面。
? 盖上盖子。
? 36°C ± 2°C 培养 4- - 4 ?小时得到 次结果，如需要，可在 24 小时(± 2 小时)读取 次结果。
试条判读
经 4 小时孵育后：
? 加入附加试剂：
- VP 试验：各加 1 滴 VP 1 和 VP 2.。
- HIP 试验： 加 2 滴 NIN。
- PYRA, ?GAL, ?GUR, ?GAL, PAL and LAP 试验：各加 1 滴 ZYM A 和 ZYM B（*）。
*建议在 使用前控制每个 ZYM B 安瓿。
为了消除任何缺陷试剂，建议按照质控章节所述应用 ATCC®
700400 菌株进行质量控制检测。
? 等待 10 分钟，参照读表读其反应结果。如需要，暴露试验条于强光下（1000 W 灯泡 10 秒），使 PYRA 到 LAP
管内多余试剂脱色。
如遇下属情况须重新孵育：
- 分辨力很低。
- 数值图谱难以接受或者可疑：
3链球菌及相关微生物鉴定试剂盒（比色法） 版本号 07625L-CN–2010/07
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IDENTIFICATION NOT VALID
BEFORE 24 HOURS OF INCUBATION
这种情况下，需要经 24 小时后，再读 ESC、ADH、和 RIB 至 GLYG 的反应结果。不需要重新判读酶反应（HIP、
PYRA、?GAL、?GUR、?GAL、PAL、LAP）和 VP 试验的结果。反应结果记录于报告单。
【阳性判断值或者参考区间】
请参考本说明书后的鉴定表，表中列出了各种生化反应预期结果范围。
【检验结果的解释】
鉴定结果可根据数值编码获得。
? 数值编码的确定：
在结果报告单，每 3 个试验为一组，每个试验结果赋予数值 1、2 和 4。在每组中，阳性反应以相应的数字相
加，从而得到一个 7 位数字。
? 鉴定：
鉴定结果是根据数据库(V7.0)得到。
* 根据鉴定检索手册：
- 从检索手册中查找数字编码。
* 根据 apiwebTM鉴定软件：
- 在键盘上输入 7 位数字的数值编码。
